3 de septiembre de 2009

Extraccion de ADN

Extracción de ADN:
Esta técnica consiste en extraer ADN a partir de glóbulos blancos de sangre entera humana. Para ello se utilizan equipos comerciales de probada calidad.

Protocolo:

1. Insertar 300 µl de muestra de sangre, junto con 900 µl de solución de lisis de globulos rojos y mezclar por inversión; esto se realiza con el objetivo de quedarnos solo con los globulos blancos. Vortexear.
2. Centrifugar por 1 minuto a 14500 rpm
3. Descartar el sobrenadante.
4. Agregar 300 µl solución de lisis de globulos blancos y procurar disolver bien. Romper el coagulo de globulos blancos con pipeta.
5.Agregar la solución desproteinizadora en un volumen de 100 µl y vortexear durante 20 segundos.
6. Centrifugar durante 3 minutos a 14500 rpm
7. Pasar el sobrenadante a otro tubo con isopropanol (300 µl). De esta manera precipita el ADN.
8. Centrifugar durante 3 minutos a 14500 rpm
9. Descartar el sobrenadante; agregar 300 µl de etanol 70% con el objetivo de lavar el ADN. Vortexear.
10. Centrifugar durante 3 minutos a 14500 rpm
11. Sacar el etanol mediante el uso de la centrifugadora en vacío durante 10-15 minutos; o bien dejándolo media hora en la estufa a 37ºc.
12. Rehidratar el ADN con 100 µl de la solución de rehidratación de ADN.
13. Llevar 1 hora a 65ºC o bien toda una noche a 4ºC.

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