Espectrofotometria de UV para oligonucleotidos

Aca les dejamos el protocolo con el que nos manejamos para medir la absorbancia (y de tal manera, la cc) de los oligonucleotidos, ya sea ADN doble o simple cadena o ARN.


Protocolo para medir la absorbancia de un oligonucleótido.
1. Encender 20 min la lámpara de UV en el espectrofotómetro para su calentamineto y seleccionar la longitud de onda a 230 y 260nm
2. Usar agua bidestilada en una celda de cuarzo y utilizarla como blanco de referencia (una celda de plástico no trasmite eficientemente la luz ultraviloleta y por lo tanto NO debe utilizarse para este procedimiento).
3. A 990 µl de agua bidestilada en un tubo de 1.5ml, agregar 10µl de solución de oligonucleótido, mezclar bien y transferir a la celda de cuarzo que se utilizó para el blanco.
4. Leer la absorbancia a 230 y 260nm de la muestra

NOTA:
- A 260nm, el DNA debe mostrar una absorbancia máxima.
- El valor de la lectura a 230nm (longitud de onda mínima) está influenciado por la cantidad de sales presentes en la muestra.